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【已知图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点,且限制酶的切点是唯一的,外源DNA插入会导致相应的基因失活.请回答有关基因工程操作的问题:(1)图1表示的是一个经过___的作为载体的质】
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更新时间:2024-04-27
问题描述:

已知图1、图2中标注了相关限制酶的酶切位点,且限制酶的切点是唯一的,外源DNA插入会导致相应的基因失活.请回答有关基因工程操作的问题:

(1)图1表示的是一个经过___的作为载体的质粒,其化学本质是___.作为基因表达载体,除图1所示结构外,还需具有___.

(2)根据图中所给信息,构建基因表达载体时,应选用的限制酶是___.若将基因表达载体导人大肠杆菌,一般先用钙离子处理,使其成为___细胞,以利于吸收周围环境中的DNA分子;然后让基因表达载体在___中与该细胞混合,调控温度完成转化过程.

(3)为了筛选出含目的基因的大肠杆菌,应在培养基中添加___,培养一段时间后,平板上长出的菌落,用PCR技术鉴定时,所用的引物是图2中___.

涂春鸣回答:
  (1)图1表示的是一个经过人工改造的作为载体的质粒,质粒的化学本质为小型环状DNA;基因表达载体的组成包括启动子、终止子、目的基因和标记基因等.   (2)选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点,但BamHⅠ可能使质粒中的启动子丢失,因此只能选BclI和HindⅢ两种限制酶切割.将目的基因导入微生物细胞常用感受态细胞法,即用Ca2+处理,使其处于感受态,以利于吸收周围环境中的DNA分子;然后让基因表达载体在缓冲液中与该细胞混合,调控温度完成转化过程.   (3)了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌,根据质粒上的抗性基因,应在筛选平板培养基中添加四环素.PCR技术要求两种引物分别和目的基因的两条单链结合,沿相反的方向合成子链,故所用的引物组成为图2中引物甲和引物丙.   故答案为:   (1)人工改造 环状DNA分子 目的基因和终止子   (2)BclI和HindⅢ感受态 缓冲液   (3)四环素 引物甲和引物丙
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